1、Q:要測定打疫苗三次的抗體的變化，當ELISA標化后，是不是要用同一個抗原的包被濃度，同一個血清的稀釋度，然后看OD值的變化？實驗動物有多個，實驗數據又如何處理呢？

A: nanwxd網友觀點：

關于是不是要用同一個抗原的包被濃度，同一個血清的稀釋度，然后看OD值的變化？

這是肯定的ELISA做得很好的話批間CV都要有10～15％左右，*好用同一個抗原，但對于包被的抗原濃度對OD的影響不是很大，只要不是差別太大即可。抗血清當然要用同一個稀釋度了。另外比較的話就必每批，每塊板上的樣品都要伴隨著一個參比品一同做，參比品（自己可以選定一個，如**次**獲得的抗血清憑取一個。當然**是有一個間期的，參比品的保存是一個問題，本試驗中用的參比品為抗血清，我想以加入30％甘油-20度凍藏比較穩妥）*好還是同一個這樣才能保證實驗結果的可比性。

分析：

（1）將同 一只動物**不同時間后抗體產生的效價進行比較。

（2）由上面可以得出一組數據，舉個例子即如某個**間期抗體升高2倍的有多少，升高4，8，16...的各有多少，然后可知大多數情況下可升高多少，即此種升高率的陽性率，然后再用泊松分布證明此陽性率是否附和總體在這個**間期增高的陽性率，還是由于隨機誤差的原因使實驗得到了這個結果。

（3）統計出不同間期的效價水平后，可以用方差分析進行總體比較，證明不同間期**的效果差異是否有統計學意義；然后再兩兩之間進行比較看看**效果*明顯的是哪個間期。

2、Q：血清做個什么樣的稀釋才能保證這個時候由血清的本底反應造成的假陰性或者假陽性少呢？用一份血清做瓊擴，效價在1：8，沒有達到很好的結果，但是這份血清用ELISA測OD值是或許能夠達到一個很大值，這個問題怎么解決？

A: nanwxd網友觀點：

（1）血清做個什么樣的稀釋才能保證這個時候由血清的本底反應造成的假陰性或者假陽性少呢？

本底反應一般是造成假陽性，對于假陰性hanyongjun_4675戰友的意思是說實驗中出現了ELISA做出來的是陰性，但瓊脂糖**擴散是陽性？是否由于假陰性的存在是有干擾的類似物存在？

（2）ELISA測得的OD值很高，但瓊擴，效價不高，只有1：8

這個問題對于不同個動物之間也許會存在，但對于同一個動物身上出現的可能性比較少，出現這種情況原因多為抗體親和力的問題，還有非特異性干擾的因素，對于后者可以做陰性對照進行消除，陰性對照可以有兩種方法：a.用沒有**的與被**動物同種的動物的血清做對照。b.對于用了佐劑的，*嚴謹的實驗設計是應該用幾只動物只**不加抗原的佐劑，因為佐劑本身也會產生一定的抗體，這種抗體是否會與你**的抗原之間產生交叉反應，這也是值得考慮的問題。

此外還需要注意的一個問題是，**早期產生的是IgM，后斯產生的是IgG，那么這就存在這兩種抗體水平的比較。同時也就要注意酶標抗抗體的特異性的問題，即有的抗抗體只針對IgG，而有的特異性則不太好。